発明情報

背景

ゲノム編集における二本鎖DNA切断の修復では、非相同末端結合(NHEJ)経路が主であり、ターゲット部位に塩基の欠失や挿入を起こすことができるが、一方で変異は回避できません。そのため、ターゲット部位に所望の塩基置換を導入するには相同組換え(HR)経路による正確な塩基置換を誘導する必要があります。これまで、HR経路を利用する方法として、様々な方法が検討されてきたが、効率が悪く目的細胞樹立までに手間と時間がかかることが課題でした。

発明概要と利点

本発明では、以下の工程により目的の遺伝子変異を導入することができます。

• 配列特異的DNA切断酵素と核内受容体との融合タンパク質を、発現誘導型プロモーターの制御下で発現させる。
• 融合タンパク質を核内移行させ、核内移行した融合タンパク質が配列特異的にゲノムDNAを切断し二本鎖DNA切断を形成する。
• DNA切断修復機構を利用して、二本鎖DNA切断を修復するとともに、二本鎖DNA切断の近傍に遺伝子変異を導入する。

➢標的配列に対する配列特異的DNA切断酵素の特異性を向上

ゲノム編集において、標的配列以外の位置に遺伝子変異が生じるオフターゲット効果を抑制できます。