発明情報

背景

CRISPR/Cas9 Systemは、ヌクレアーゼであるCas9蛋白質(Cas9)と標的配列に相補的な20塩基を組み込んだシングルガイドRNA(sgRNA)により、目的遺伝子を切断するものです。近年、このCRISPR/Cas9 Systemを細胞治療に用いようとする動向があります。しかし、CRISPR/Cas9 Systemを用いたCas9とsgRNAの細胞内導入には、プラスミドが用いられてきたため、それらがゲノムに挿入され変異が生じる危険性がありました。またプロモーターの特異性が低いために細胞特異的にゲノム編集することが難しいという問題がありました。

発明概要と利点

本発明によれば、miRNAによって特異的に認識される核酸配列とヌクレアーゼのコード領域に対応する核酸配列を機能的に連結させることで、ヌクレアーゼの活性を制御できるようになります。（図１）

連結というのは、ヌクレアーゼをコードするオープンリーディングフレーム（ただし、開始コドンを含む。）の5'UTR内、3'UTR内、及び／または当該オープンリーディングフレーム内に、少なくとも１つのmiRNAの標的配列を備えることを意味します。

さらにトリガータンパク質をコードするmiRNA応答性mRNA(miRNAスイッチ)とヌクレアーゼをコードするトリガータンパク質応答性mRNAの２種類を組み合わせたヌクレアーゼ制御を開発しました。（図２）