発明情報

背景

胆管発生過程の異常はDPMと呼ばれ、これを初期表現型とし、未だ根治的治療法のない多くの疾患が知られている。新たな治療法が望まれているが、このヒト病態を正確に模倣するモデルがないこと、ヒトとげっ歯類では胆管上皮細胞における遺伝子発現パターンが異なることにより、DPMに起因する種々の疾患についての発生初期の病態解析や治療法の開発が困難であった。そこでiPS細胞を用いた胆管上皮細胞のモデル作製が望まれていた。

発明概要と利点

本発明は、肝芽細胞をトランスフォーミング増殖因子(TGFβ)および上皮成長因子(EGF)を含む培地で培養することで、胆管上皮前駆細胞を製造することができる。この方法によって、経時的にDuctualPlate(DP)期様、RemodelingDuctulPlate(RDP)期様の胆管上皮前駆細胞を誘導することに成功した。

➢アクアポリン１(AQP1)がRDP期の胆管上皮前駆細胞のマーカー遺伝子となる
AQP1遺伝子の発現を指標として、RDP期またはそれ以降にある細胞と、DP期にある細胞を分離することができた。（図１の右：AQP1が発現しているものが、RDP期）
本発明は、さらに肝芽細胞および胆管上皮前駆細胞から管腔様三次元構造の構築に成功した。

➢iPSC由来の三次元管腔様構造を有する培養物は胆管の生理的機能を有する
ローダミン123の取り込み試験を行ったところ、三次元管腔様構造を有する培養物がローダミン123を取り込むこと、およびベラパミルの存在下ではこのローダミンの細胞内への取り込みが顕著に抑えられることが確認された。(図2)